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HUVEC(HUV-EC-C):苏州鉴达细胞株鉴定预警系列9日期:2021-03-22

本文参考:ExPASy Database、ATCC Database、JCRB Database


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导读

● 由于能够参与血管形成、调节血管内外大分子和炎症细胞的交换、被激活时可以产生多种活性介质,血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)成为心血管、肿瘤、炎症、免疫、药理等多学科研究的靶点。作为经典的血管内皮细胞株,HUVEC的建立为VEC相关研究提供了理想模型。


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(图片来源:STR profile of HUVEC, JCRB


● 目前ExPASy、ATCC、JCRB均收录了HUVEC的标准STR数据,ExPASy与ICLAC未将其标注为问题细胞。但鉴达的鉴定结果显示,国内的HUVEC细胞株也已经出现被污染的情况。




来源


1984年,HUVEC细胞株由Hiroyoshi Hoshi、Wallace L.Mckeehan从一段长约10-20cm的人正常脐带静脉中获取、建立。前期收集得到的细胞团块经MCDB107培养基(含Bovine pituitary extract、FBS)重悬后,接种于覆有胶原蛋白的60-mm培养皿中,细胞汇合后胰酶消化、收集细胞。之后接种于覆有胶原蛋白的T-75培养瓶中进行第二次培养,即为HUVEC细胞株第一代。细胞形态符合人类内皮细胞形态特征,细胞呈铺路石样;Ⅷ因子相关抗原染色鉴定结果为阳性。HUVEC细胞能够在半固体培养基上生长,形成菌落。细胞无致瘤性。

2018年,Setsuko Shioda等人发现HUVEC细胞株(passage 31)在贴壁汇合时细胞与细胞之间存在间隙,这与典型的内皮细胞特征有所不同。


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图片来源:Hoshi and McKeehan, 1984


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图片来源:Setsuko Shioda et al., 2018


SetsukoShioda等人研究发现,HUVEC细胞株18-30代的倍增时间为23.5个小时,24-27代的倍增时间为67个小时,27-30代的倍增时间为84个小时,32-34代的倍增时间为100个小时。培养至40代后,细胞形态出现多样化,有些细胞变大或变小,有些细胞出现多核;细胞密度下降、倍增时间延长。最后细胞在第54代停止生长,ATCC的预期寿命也显示在50-60代。

更重要的发现是,HUVEC的HHV-6(Human herpes virus 6)病毒检测呈阳性,HHV-6基因组整合到了HUVEC的9号染色体长臂的远端。不过整合区域位于亚端粒,HHV-6基因组只有一个拷贝数,因此对HUVEC细胞增殖及端粒功能未产生影响。


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  图片来源:Setsuko Shioda et al., 2018


SetsukoShioda等人对细胞株进行STR分型,其结果与数据库中HUVEC标准数据一致,不过D13S317位点会出现轻微突变——偶尔出现单个等位基因缺失的现象。


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 鉴达的HUVEC鉴定


与NCM-460情况类似,目前HUVEC细胞株在Cellosaurus、ICLAC中未被标注、登记为问题细胞。但鉴达的HUVEC鉴定结果显示,国内可能已经不存在真正来源于Hoshi 、McKeehan建立的HUVEC细胞株。

截止目前,鉴达受理HUVEC细胞株鉴定共计22株。与ExPASy、DSMZ等数据库重新比对确认后,实际鉴定结果显示:有14株为T-24,4株为无匹配结果,2株为三种未知细胞的交叉污染(多个位点同时出现了4-6个等位基因),1株为EA.hy926,1株为非人源细胞株。


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(图片来源:鉴达的HUVEC鉴定结果统计


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(图片来源:鉴达的HUVEC鉴定报告


因此鉴达建议,国内HUVEC细胞株最好停止使用。如果从国外细胞供应商购买,也应及时进行STR鉴定,以确认其身份。



参考文献:

1. HiroyoshiHoshi, Wallace L.Mckeehan, Brain- and liver cell-derived factors are requiredfor growth ofhuman endothelial cells in serum-free culture. Proc Natl Acad Sci USA. 1984Oct;81(20):6413-7.

2. SetsukoShioda et al., The human vascular endothelial cell line HUV-EC-C harbors theintegrated HHV-6B genome which remains stable in long term culture. Cytotechnology. 2018 Feb;70(1):141-152.



苏州鉴达采用STR分型技术,针对人源细胞20个位点进行检测,3130XL型遗传分析仪进行毛细管电泳,与DSMZCellosaurusATCC等数据库进行比对,出具权威英文报告,为全国近290家科研机构(高校、研究所、医院、公司)提供高质量服务,多家单位已利用鉴达细胞株鉴定服务在高水平期刊(如Clinical Cancer ResearchNature CommnicationsInt J Cancer等)发表论文。

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