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国内细胞支原体检测服务正式开启日期:2022-03-22


本公司自行研发的支原体检测试剂盒(GTB's Mycoplasma Detection Kit)已上线,正式开启支原体检测服务!
试剂盒研发思路是以支原体检测主流方法—PCR法为基础,对支原体16S rRNA核酸高度保守序列设计、优化引物;引物由FAM荧光标记、可对多种支原体进行扩增。本试剂盒能扩增出多达528个大小为190bp的产物,具有高度广谱性。

(鉴达生物 支原体检测图谱)

在细胞培养过程中,支原体污染成为世界性问题,约有30%-60%的细胞培养物存在支原体污染。造成这种情况的原因主要有以下四点:支原体体积非常小,为0.15-0.3um,一般无法通过滤器进行去除;支原体形态多变,光学显微镜下也难以观察它的形态结构;支原体生命力顽强,可在PH7.6-8.0条件下生存,对一般抗生素不敏感;支原体污染细胞后,多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可能由于传代、换液而缓解,因此容易被忽视。


(支原体结构图  来源:ATCC)


调查发现,大约有190种可知的支原体;其中大约有二十多种支原体能够污染细胞,有的细胞株甚至会被两种以上的支原体同时污染。研究表明,污染细胞的支原体95%以上为以下8种:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)、发酵支原体(M.fermentans)、人型支原体(M.hominis)、唾液支原体(M.salivarium)、梨支原体(M.pirum)


(8种主要导致细胞污染的支原体  来源:ATCC)


支原体污染的来源主要包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染以及制备细胞的原始组织及器官的污染等。


(支原体污染原因  来源:ATCC)

支原体污染细胞后,首先会影响细胞的生长状态及形态,由于支原体的存在会导致培养基中支持细胞生长的营养物质减少,造成细胞生长缓慢甚至停止,还会导致细胞微管解聚,引起细胞一系列病变;也会影响细胞的正常代谢和功能,蛋白质、DNA、RNA合成发生障碍、破坏细胞膜完整性、影响细胞信号传递、染色体发生异常;此外,支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响淋巴细胞分化等。最严重的后果是有些科研实验结果是在支原体阳性的细胞中得到的,数据的真实性和可靠性大大下降。

(Vero细胞被猪鼻支原体污染后镜下形态  来源:ATCC)

常用的支原体检测方法有传统的分离培养法、指示细胞培养法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分离培养法基本不会出现假阴性结果,因此被誉为支原体检测金标准。不过也存在两个弊端,一是检测时间太长,支原体要长出明显克隆至少需要4周时间;二是尽管可以检测绝大多数支原体种类,分离培养法也有力所不及的时候,例如猪鼻支原体(M.hyorhinis)。指示细胞培养法(DNA染色法)则灵敏度比较低,因背景荧光的存在,细胞轻度支原体污染不易检出;细胞裂解死亡产生碎片也会被荧光染料染色被误认为是支原体染色所致造成假阳性;另外,荧光染色法一般要求培养无污染的指示细胞作为对照,增加了检测的工作量。
目前,PCR法为主流的支原体检测手段,PCR法虽然比传统分离培养法检测时间大大缩短,不过已有的PCR支原体检测也存在一些问题,如引物设计不好,导致检测的灵敏度及特异性不够;而且,现在主流的检测试剂盒只能针对某一种或几种支原体,广谱性差。

(鉴达生物 支原体检测报告)

相较于以上检测方法,由于能够扩增多达528种支原体,鉴达的PCR法试剂盒能够快速、同时检测多种支原体,因此不仅解决了传统分离培养法检测时间长、指示细胞培养法(DNA染色法)灵敏度低的问题,又优化了现有PCR检测中存在的广谱性差的问题。

目前,鉴达已陆续受理了多家单位委托,进行支原体检测。试剂盒专利申请也进入初级审核阶段。

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苏州鉴达采用STR分型技术,针对人源细胞20个位点进行检测,3130XL型遗传分析仪进行毛细管电泳,与DSMZCellosaurusATCC等数据库进行比对,出具权威英文报告,为全国近300家科研机构(高校、研究所、医院、公司)提供高质量服务,多家单位已利用鉴达细胞株鉴定服务在高水平期刊(如Clinical Cancer ResearchNature CommnicationsInt J Cancer等)发表论文。

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