本文参考：ExPASy Database、ATCC Database、NSTI Database

导读

● FHC(Fetal Human Colon)细胞株为人正常结肠上皮细胞。它的建立对结肠相关的基础实验具有重要意义，尤其在揭示结肠癌病因学研究中，为实验人员提供了一个合适的体外实验模型。

（图片来源：STR profile of FHC, ATCC）

● 目前ExPASy (Cellosaurus)、ATCC均已收录FHC的标准STR数据。ExPASy与ICLAC虽未将其标注为问题细胞，但鉴达的鉴定结果显示，FHC细胞株已出现被污染的情况。

FHC由K.M. Siddiqui、D.P. Chopra于1984年建株。细胞株来源于由阿拉巴马大学医院提供的合法流产胎儿（孕周大约13-17周）的结肠粘膜组织。   

结肠与大肠、回肠等分离后，将其纵向剥离、用L15培养基进行数次冲洗以去除其他残留物。结肠粘膜从肌层轻轻刮下，转移至含0.1%胶原酶但无FBS的培养基中；粘膜切碎后在36.5℃、CO2与空气比为5%:95%的湿化气体条件下进行30min孵育；孵育后，对组织进行轻柔摇动、转移至含0.1%胶原酶的HBSSF培养基中、在磁力搅拌器上36.5℃条件下裂解5min；组织悬浮液600rpm下离心2min；上清液去除、沉淀用含0.1%胶原酶的HBSSF培养基重悬，并继续裂解15min；细胞悬浮液加入等量的含10%FBS培养基、80x g条件下离心7min；沉淀用含10%FBS培养基重悬；台盼蓝染色排除法计算细胞活力及密度。

将原代FHC细胞分别在35mm、60mm培养皿中进行接种。培养第一周，培养基24h换一次；此后48h换一次。另外，在培养过程中会出现星状成纤维细胞，需要经常用橡胶刮板将其去除。培养24h后，大部分贴壁细胞会出现独特形态特征：总体呈多边致密形态、细胞边缘光滑 、细胞间紧密粘附。PAS染色阳性结果显示细胞可合成粘多糖。电镜结果也显示细胞间的紧密粘附形态，主要通过桥粒、细胞表面的微绒毛建立胞间致密联系。原代培养细胞中也发现了肠道杯状细胞，除了具有典型的可分泌黏蛋白原的小囊泡，也具有和FHC细胞一样的桥粒和微绒毛。

（图片来源：Images of FHC, ATCC）

（图片来源：K.M.Siddiqui and D.P. Chopra,  1984）

原代细胞培养2-3周后，收获具有上皮细胞形态特征的细胞进行传代培养，一般接种后24h会再次贴壁。除了具有原代细胞的形态特征及PAS染色阳性结果，传代培养细胞还具有胞间指状突、致密染色质的锯齿状核、浓集趋边的异染色质。另外，溶酶体及多泡体在传代培养细胞可以观察到，但在原代细胞中则不常见到。

细胞生长动力学方面，通过对第13代细胞生长观测发现,FHC细胞株的倍增时间大约为62h。

  （图片来源：K.M.Siddiqui and D.P. Chopra,  1984）

自建株以来，FHC便常被用于各种基础实验中，主要集中于结肠癌发生机制、细胞分化调节及细胞凋亡等相关研究。2010年Karel Soucek 等人便发现，FHC细胞有相当数量的染色体异常、TP53基因也存在突变；另外细胞株在体外的半固体培养基上具有锚定非依赖性生长能力，在SCID小鼠体内能够形成固体瘤。这些独特的分子生物学方面的特性，让FHC成为更具价值的实验模型。

（图片来源：Karel Souceket al., 2010）

不过，随着在各实验室的培养传代、实验，以及实验室间的购买、交换，FHC细胞株逐渐被其他细胞污染。与其他被污染细胞株一样，2001年之前（STR分型还未逐步被应用到细胞株鉴定工作中）这种情况并未引起各方重视。目前FHC在Cellosaurus、ICLAC中未被标注、登记为问题细胞。但鉴达的FHC鉴定结果显示，FHC细胞株确实已经出现被污染的情况。

截止目前，鉴达受理FHC细胞株鉴定共计16株。与ExPASy、DSMZ等数据库重新比对确认后，实际鉴定结果显示：有10株为AGS，4株为HELA S3，2株为无匹配结果。鉴达所受理的16株FHC错误率达到了100%。

（图片来源：鉴达的FHC鉴定结果统计）

（图片来源：鉴达的FHC鉴定报告）

因此鉴达提醒各位老师，应谨慎使用FHC细胞株。若课题实验必须用FHC，鉴达建议大家，不管何种渠道的细胞株（实验室已有细胞或新采购买入的细胞）都应及时进行STR鉴定，以确认其身份。

参考文献：

1. Primary and long termepithelial cell cultures from human fetal normal colonic mucosa. InVitro. 1984 Nov;20(11):859-68. doi: 10.1007/BF02619632.

2. Fetalcolon cell line FHC exhibits tumorigenic phenotype, complex karyotype, and TP53 gene mutation. Cancer Genet Cytogenet. 2010 Mar;197(2):107-16.

苏州鉴达采用STR分型技术，针对人源细胞20个位点进行检测，3130XL型遗传分析仪进行毛细管电泳，与DSMZ、Cellosaurus、ATCC等数据库进行比对，出具权威英文报告，为全国近290家科研机构（高校、研究所、医院、公司）提供高质量服务，多家单位已利用鉴达细胞株鉴定服务在高水平期刊（如Clinical Cancer Research、Nature Commnications、Int J Cancer等）发表论文。

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